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第200章 35%(感谢牛津面的盟主!)(第1页)

学校的实验室条件没那麽好。

空调老化,地方不大,房间里人也有点多。

条件算是艰苦吧,大家却一点不觉得累,一个个热血沸腾的,就想着快点把这个项目做出来。

陈浩上次这麽有动力的时候还是在大二夏天,跟老江去参加网吧举办的CS1。6网吧赛0

时过境迁。

曾经的M4网瘾少年,现在已经变成使用移液枪的高手了。

蔡卓群将无酶水吸出,打入离心管底部,反覆吹打。

王晓晴观察片刻後说:「测一下吧。」

蔡卓群点点头,拔下枪头,拿着样本走到NanoDrop分光光度计前。

用移液枪吸取了1微升样本,滴在检测基座上,放下检测臂,在连接的旧桌上型电脑上点击了测量。

屏幕上很快跳出了数据。

陆晓林停下了手里的活,转头问道:「多少?」

蔡卓群:「浓度12ngul,A260280比值是1。32,A260230比值是0。7。

C

王晓晴盯着屏幕看了一会儿,有点无奈:「这已经是第四批废样了————」

项目的难度远远超出除江河外所有人的预期。

虽然之前江河用加入DMSO的方法,解决了PCR扩增阶段引物二聚体的问题。

但解决了一个问题,接下来还会出现更多的问题——

现在的瓶颈,卡在了提取上。

miRNA在血液中的含量极低,且非常容易被血液中的RNA酶降解。

纯度不够。

A260280的比值正常应该在1。8到2。0之间,低於1。8就意味着样本中存在大量的蛋白质污染。

而A260230比值只有0。7,更是说明里面混了大量的酚类物质或者盐离子。

用这种样本去做下一步的逆转录,杂质会让逆转录酶失活,後面的PCR扩增根本跑不出真实数据。

蔡卓群试图寻找原因:「王教授,是不是氯仿的用量不够?我们在取上清液的时候,可能还是带入了一些中间层的蛋白质。」

王晓晴摇摇头:「上一批我们已经把氯仿的比例提高了百分之二十,离心时间也延长了五分钟,纯度是稍微好了一点,但是浓度直接掉到了5ngul以下。」

陆晓林在一旁分析:「血清里全是蛋白,游离的核酸少,TrizoI提取法,用在血清上,天生就有缺陷。」

实验室众人,陷入沉默。

其实在後世,有专门针对血清的柱提法商业试剂盒,傻瓜式操作,半个小时就能得到高纯度的miRNA。

但在08年,专门针对液体活检的试剂盒在国内根本买不到,就算买到了技术也还远未成熟,所以只能用最基础的化学试剂,手工一步步去抠。

蔡卓群问:「王教授,有什麽办法没?」

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